モノクローナル標識Tag抗体
アガロースを結合した抗体は、細胞ライセートからのタンパク質の免疫沈降などに用いられます。POD標識抗体はウェスタンブロッティング・ELISAなどに適用され、標識二次抗体を用いる必要がなく時間・手間を省くことができます。
製品ラインアップ
| 製品名 | 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|
| Agarose Conjugate | |||
| Anti-GFP(Rat IgG2a), Monoclonal(GF090R), CC, Agarose Conjugate | 06083-05 | 500 μg |  |
| Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate | 04145-55 | 500 μg | |
| POD Conjugate | |||
| Anti-GFP(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(GF200), AS, POD Conjugated | 05178-34 | 50 μg | |
| Anti-GST(Mouse IgG2a-κ), Monoclonal(GS019), AS, POD Conjugate | 04559-74 | 50 μg | |
| Anti-6xHis(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(HI192), AS, POD Conjugated | 04546-34 | 50 μg | |
| Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, POD Conjugated | 04554-24 | 50 μg | |
| Anti-V5(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(V5005), AS, POD Conjugated | 04578-24 | 50 μg | |
Anti-GFP(Rat IgG2a), Monoclonal(GF090R), CC, Agarose Conjugate
弊社ラット抗GFP抗体は、世界中で使用されており、使用文献も多数報告されています（抗体の使用文献はこちら）。ここでは、アガロースにこのラット抗GFP抗体を結合した製品を紹介します。
製品説明
| Clone | GF090R |
|---|---|
| Isotype | IgG2a（Rat） |
| Size | 500μg |
| Antibody Protein | 2mg antibody/ml agarose |
| Product form | 1:1 suspension in Dulbecco's PBS(-) |
使用例
実験概要
- EGFPまたはEGFP-myosinを発現するHEK-293細胞のライセート1mlに、抗GFP抗体アガロースを20μlそれぞれ添加し、4℃で2時間免疫沈降した。
- SDSサンプルバッファーを加え、90℃で10分間処理し、SDS-PAGEを行った。
- 抗GFP抗体を用いてウェスタンブロッティングにより、EGFPとEGFP-myosinを検出した。
データご提供：
京都大学 生命科学研究科 高次生命科学専攻 高次生体統御学 垣塚研究室
垣塚 彰 教授 / 堀 清次 講師 / 笹岡 紀男 研究員
使用文献
Kumeta, M et al. Molecular mechanisms underlying nucleocytoplasmic shuttling of actinin-4. J Cell Sci. 123(Pt 7), 1020-30 (2010).
Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate
製品説明
| Clone | MC045 |
|---|---|
| Isotype | IgG1-κ（Mouse） |
| Size | 500μg |
| Antibody Protein | ca. 2mg antibody/ml agarose |
| Product form | 1:1 suspension in Dulbecco's PBS(-) |
使用例1
c-Mycタグの付いたプラスミドを細胞にトランスフェクションしました。その後細胞ライセートをc-Myc-Agarose抗体で免疫沈降し、ウェスタンブロッティングでの検出を行いました。
| 免疫沈降 | Anti-c-Myc, Agarose conjugate（1:500） |
|---|---|
| ウェスタンブロッティング | Anti-c-Myc（#04362） |
データご提供：国立大学 研究者
使用例2
■c-Myc tagged Proteinとの反応
実験概要
- 均一に懸濁させたAnti-c-Myc-Agarose（#04145-55）0.05mlをフタ付きポリプロピレン容器（0.5ml）に分注し、Rinse buffer 0.4ml、およびc-Myc tagged protein（1mg/ml）1μlを添加して静かに転倒攪拌する（室温、2時間）。
- 遠心分離（10秒間）で樹脂を沈殿させた後、Rinse bufferを分注器で吸引除去する。さらに、新たなRinse buffer 0.4mlを加えて転倒攪拌（10秒間）して遠心分離する。（5回繰り返し）
- Rinse bufferを濾紙片で十分に吸引除去したAgarose樹脂、未使用の同Agarose樹脂、およびフタ付きポリプロピレン容器（0.5 ml）に分注したc-Myc tagged protein（1mg/ml）1μl、の各々にSDS-PAGE電気泳動緩衝液（+2ME）0.05mlを添加して煮沸水浴で加熱（5分間）する。
- 水冷後に遠心分離（10秒間）して、各上清1μlをSDS-PAGE（10%）で電気泳動する。
*Rinse buffer:50mM Tris-HCl pH7.5, 150mM NaCl, 1%(v/v)NP-40, 10mM EDTA, 1mM PMSF, 10μM pepstatin, 20μM leupeptin
| SDS-PAGE（10%） | 30mA constant, 60分 |
|---|---|
| サンプル | ①M.W. Marker ②Anti-c-Myc-Agarose + c-Myc tagged protein ③Anti-c-Myc-Agarose ④c-Myc tagged protein |
結果
Anti-c-Myc-Agarose（左図③）にc-Myc tagged protein（左図④）を反応させた結果、c-Myc tagged proteinはAgarose樹脂に結合した（左図②）。
使用例3
■非特異吸着の確認
実験概要
使用例2と同様の手順でc-Myc tagged protein（1mg/ml）をbacterial lysate 1μlに変えて操作しました。
| SDS-PAGE（10%） | 30mA constant, 60分 |
|---|---|
| サンプル | ①M.W. Marker ②Anti-bacterial lysate ③Anti-c-Myc-Agarose + bacterial lysate |
結果
不特定多数のタンパク質を含有するbacterial lysateをAnti-c-Myc-Agaroseに反応させても、非特異的なタンパク質の樹脂吸着はほとんどおこっていません。
Anti-GFP(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(GF200), AS, POD Conjugated
製品説明
| Clone | GF200 |
|---|---|
| Isotype | IgG1-κ（Mouse） |
| Product form | Liquid |
| Immunogen | His-GFP（full length） fusion protein |
| Application | Western Blotting 1:1,000-1:2,000 ELISA 1:2,000-1:4,000 |
Anti-GST(Mouse IgG2a-κ), Monoclonal(GS019), AS, POD Conjugate
製品説明
| Clone | GS019 |
|---|---|
| Isotype | IgG2a-κ（Mouse） |
| Product form | Liquid |
| Immunogen | Glutathione S-Transferase（GST） |
| Application | Western Blotting 1:4,000-1:8,000 ELISA 1:30,000-1:60,000 |
Anti-6xHis(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(HI192), AS, POD Conjugated
製品説明
| Clone | HI192 |
|---|---|
| Isotype | IgG1-κ（Mouse） |
| Product form | Liquid |
| Immunogen | 6xHis synthetic peptide [HHHHHH] conjugated with KLH |
| Application | Western Blotting 1:1,000-1:2,000 ELISA 1:30,000-1:60,000 |
使用例
ロシュRTS500で合成したGFP-His6を原液もしくはPBSで10倍希釈したものを各々2.5μlアプライした。
| Lane1 | GFP-His6（原液） Anti-His6（A社）（1:100,000）, Anti-Mouse IgG （1:100,000） |
|---|---|
| Lane2 | GFP-His6（10倍希釈液） Anti-His6（A社）（1:100,000）, Anti-Mouse IgG （1:100,000） |
| Lane3 | GFP-His6（原液） Anti-His6 POD（#04546）（1:100,000） |
| Lane4 | GFP-His6（10倍希釈液） Anti-His6 POD（#04546）（1:100,000） |
Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, POD Conjugated
製品説明
| Clone | MC045 |
|---|---|
| Isotype | IgG1-κ（Mouse） |
| Product form | Liquid |
| Immunogen | c-Myc synthetic peptide [EQKLISEEDL] conjugated with KLH |
| Application | Western Blotting 1:1,000-1:2,000 ELISA 1:30,000-1:60,000 |
Anti-V5(MouseIgG1-κ), Monoclonal(V5005), AS, POD Conjugated
製品説明
| Clone | V5005 |
|---|---|
| Isotype | IgG1-κ（Mouse） |
| Product form | Liquid |
| Immunogen | V5 synthetic peptide [GKPIPNPLLGLDST] conjugated with KLH |
| Application |
Western Blotting 1:1,000-1:2,000 |
※記載の内容は、'17年1月現在の情報に基づいております。
※研究者の皆様のご所属などは、データご提供時の情報に基づいております。