InvivoGen社 細胞質内DNAセンサーSTING研究用試薬
InvivoGen社は自然免疫研究用試薬で高い評価を受けているメーカーです。細胞質内DNAセンサーとして知られているSTING研究用の製品を紹介します。
STINGは、dsDNAの刺激によりTBK1とIRF3を活性化しI型インターフェロンの発現を誘導するアダプタータンパク質です。一方でSTINGが環状ジヌクレオチド（CDN）と直接結合することで、I 型インターフェロンを誘導することも知られています。
製品カテゴリー
STING遺伝子をノックアウトまたはノックダウンした細胞を取り揃えています。野生型と比較することでアッセイをすることができます。
ヒトまたはマウスの変異型 STINGを発現するプラスミドです。
STINGを刺激してインターフェロンの発現を誘導するリガンドで、2種類のグレードからお選びいただけます。
STINGレポーターアッセイ用細胞
STING遺伝子をノックアウトまたはノックダウンしたレポーターアッセイ用細胞を販売しています。この細胞は、IRF誘導性プロモーターにより制御されているSEAP（分泌型アルカリホスファターゼ）もしくはLucia®（ルシフェラーゼ）が組み込まれています。分泌されたSEAP、Lucia®は、検出試薬であるQUANTI-Blue™ もしくは QUANTI-Luc™を用いて簡単に検出することができます。
実施例
■THP1-Blue™ ISG 細胞とTHP1-Blue™ ISG-KD-STING 細胞のリガンドに対する応答
両細胞を50 μg/ml CDNsまたは104 IU/ml hIFN-βにより刺激し、24時間インキュベーションした後、SEAPをQUANTI-Blue™を用いて定量した。
■B16-Blue™ ISG 細胞とB16-Blue™ ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答
両細胞を30 μg/ml CDNsまたは103 U/ml mIFN-βにより刺激し、24時間インキュベーションした後、SEAPをQUANTI-Blue™を用いて定量した。
■RAW-Lucia™ ISG 細胞とRAW-Lucia™ ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答
両細胞を30 μg/ml CDNsまたは103 U/ml mIFN-βにより刺激し、24時間インキュベーションした後、Lucia®をQUANTI-Luc™を用いて定量した。
価格表
各製品にはZeocin™、Normocin™、アッセイ用の基質（QUANTI-Blue™またはQUANTI-Luc™）が含まれています。
本製品はお手元に到着次第、直ぐに培養する必要があります。
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|
| THP1-Blue™ ISG Cells | thp-isg | 3-7×106cells | 221,000 |  |
| THP1-Blue™ ISG-KD-STING Cells | thp-kdstg | 3-7×106cells | 252,000 | |
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 |
|---|---|---|---|
| HEK-Blue™ ISG Cells | hkb-isg | 3-7×106cells | 近日発売 |
| HEK-Blue™ ISG-KO-STING Cells | hkb-kostg | 3-7×106cells | 近日発売 |
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|
| B16-Blue™ ISG Cells | bb-ifnabg | 3-7×106cells | 249,000 | |
| B16-Blue™ ISG-KO-STING Cells | bb-kostg | 3-7×106cells | 274,000 | |
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|
| RAW-Lucia™ ISG Cells | rawl-isg | 3-7×106cells | 227,000 | |
| RAW-Lucia™ ISG-KO-STING Cells | rawl-kostg | 3-7×106cells | 274,000 | |
変異型STING発現プラスミド
CDNの認識やシグナル伝達に影響を与えるいくつかの変異型STINGがヒトおよびマウスで報告されています。InvivoGen社では、これら変異型STINGを発現ベクター（pUNO1）へ組み込んだ状態で販売しています。
製品情報
■変異導入部位
赤字：変異アミノ酸
| 製品名 | アミノ酸番号 | 参考文献 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 71 | 162 | 200 | 230 | 232 | 293 | ||
| hSTING-WT | R | S | I | G | R | R | - |
| hSTING-H232 | R | S | I | G | H | R | 1,2 |
| hSTING-A230 | R | S | I | A | R | R | 1 |
| hSTING-HAQ | H | S | I | A | R | Q | 1,3 |
| hSTING-A162 | R | A | I | G | R | R | 4,5 |
| hSTING-MRP | R | S | I | G | R | - | 6 |
| hSTING-N200 | R | S | N | G | R | R | 7,8 |
| 製品名 | アミノ酸番号 | 参考文献 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 70 | 161 | 199 | 229 | 231 | 292 | ||
| mSTING-WT | C | S | I | I | R | R | - |
| mSTING-Gt | C | S | N | I | R | R | 8 |
■ベクターマップ
性能評価
■変異型STINGのCDNsおよびDMXAAに対する応答
HEK- Blue™ ISG KO-STING細胞にSTING WTもしくはSTING変異体をトランスフェクションし、その細胞を、10 μg/ml 2’3’-cGAMP、3’3’-cGAMP、c-di-GMPもしくはDMXAAにより刺激した。24時間インキュベーション後、SEAPの量をQUANTI-Blue™を用いて定量した。
参考文献
- Yi, G. et al. Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING Can Affect Innate Immune Response to Cyclic Dinucleotides. PLoS One. 8(10), e77846 (2013).
- Diner, EJ. et al. The innate immune DNA sensor cGAS produces a noncanonical cyclic dinucleotide that activates human STING. Cell Rep. 3(5), 1355-1361 (2013).
- Jin, L. et al. Identification and characterization of a loss-of-function human MPYS variant. Genes Immun. 12(4), 263-269 (2011).
- Gao, P. et al. Structure-function analysis of STING activation by c[G(2',5')pA(3',5')p] and targeting by antiviral DMXAA. Cell. 154(4), 748-762 (2013).
- Conlon, J. et al. Mouse, but not human STING, binds and signals in response to the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid. J Immunol. 190(10), 5216-5225 (2013).
- Chen, H. et al. An Alternative Splicing Isoform of MITA Antagonizes MITA-Mediated Induction of Type I IFNs. J Immunol. 192(3), 1162-1170 (2014).
- Yin, Q. et al. Cyclic di-GMP sensing via the innate immune signaling protein STING. Mol Cell. 46(6), 735-745 (2012).
- Sauer, JD. et al. The N-ethyl-N-nitrosourea-induced Goldenticket mouse mutant reveals an essential function of Sting in the in vivo interferon response to Listeria monocytogenes and cyclic dinucleotides. Infect Immun. 79(9), 688-694 (2011).
価格表
各製品にはFast-media® BlasおよびBlasticidinが含まれています。
| 製品名 | 毒劇物 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| hSTING-WT | 劇 | puno1-hstingwt | 20 μg | 90,000 | |
| hSTING-H232 | 劇 | puno1-hsting-h232 | 20 μg | 96,000 | |
| hSTING-A230 | 劇 | puno1-hsting-a230 | 20 μg | 96,000 | |
| hSTING-HAQ | 劇 | puno1-hsting-haq | 20 μg | 96,000 | |
| hSTING-A162 | 劇 | puno1-hsting-a162 | 20 μg | 96,000 | |
| hSTING-MRP | 劇 | puno1-hsting-mrp | 20 μg | 96,000 | |
| hSTING-N200 | 劇 | puno1-hsting-n200 | 20 μg | 96,000 | |
| mSTING-WT | 劇 | puno1-mstingwt | 20 μg | 90,000 | |
| mSTING-Gt | 劇 | puno1-msting-gt | 20 μg | 96,000 | |
STINGリガンド
スタンダードグレード（純度95%以上）とVacciGrade™（前臨床グレード：無菌条件下で製造し、エンドトキシンレベル試験済み（1EU/mg以下））を販売しています。
価格表
| 製品名 | 構造 （●をクリック） | メーカー 製品番号 | 容量 | 価格 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| 2’3’-cGAMP | ● | tlrl-cga23-s | 500 μg | 74,000 | |
| 2’3’-cGAMP VacciGrade™ |
vac-cga23 | 1 mg | 166,000 | |
|
| 3’3’-cGAMP | ● | tlrl-cga-s | 500 μg | 57,000 | |
| 3’3’-cGAMP VacciGrade™ |
vac-cga | 1 mg | 166,000 | |
|
| 2’2’-cGAMP | ● | tlrl-cga22-s | 500 μg | 74,000 | |
| 2’2’-cGAMP VacciGrade™ |
vac-cga22 | 1 mg | 166,000 | |
|
| c-di-AMP | ● | tlrl-cda | 1 mg | 48,000 | |
| c-di-AMP VacciGrade™ |
vac-cda | 1 mg | 83,000 | |
|
| c-di-GMP | ● | tlrl-cdg | 1 mg | 50,000 | |
| c-di-GMP VacciGrade™ |
vac-cdg | 1 mg | 83,000 | |
|
| c-di-IMP | ● | tlrl-cdi | 1 mg | 50,000 | |
| c-di-UMP | ● | tlrl-cdu | 1 mg | 50,000 | |
| DMXAA | ● | tlrl-dmx | 5 mg | 41,000 | |
※記載の内容は、'14年5月現在の情報に基づいております。