GFP融合タンパク質の精製に最適
Allele社 GFP融合タンパク質の精製に最適 抗GFP抗体結合ビーズ GFP-nAb™
通常の抗体は軽鎖と重鎖からなる大きな複合体（～150kDa）ですが、ラクダ科動物由来のシングルドメイン（VHH）抗体は、重鎖可変領域のみから成る小さな抗体（～13kDa）です。この性質により、隠れたエピトープを認識でき、また非特異的な相互作用が起きないため、目的タンパク質の精製に最適です。Allele Biotechnology社では、GFPおよび遺伝子改変したGFPを認識するVHH抗体を磁気ビーズ、アガロース、もしくはポリアクリルアミドに連結した製品GFP-nAb™を販売しています。
特長
- シングルドメイン（VHH）抗体を採用
- 優れた特異性
- 高い安定性（70℃、2M NaCl、0.5% SDSの条件まで使用可能）
ラインアップ
ハンドリングに優れた磁気ビーズタイプや耐久性があり再利用可能なFPLC / HPLCに利用可能なポリアクリルアミドタイプなどを用意しています。
| 製品名 | 担体の種類 | 粒径 | 結合容量* |
| GFP-nAb™ Magnetic | 磁気ビーズ | ～1µm | >0.5µg /10µl |
| GFP-nAb™ Agarose | アガロース | ～90µm | >5µg /10µl |
| GFP-nAb™ Polyacrylamide Resin | ポリアクリルアミド | 50～80µm | >1mg/ml |
*EGFPの結合量で評価
使用例
■GFP-nAb™ Agarose Spin Kitを用いたEGFPの精製
M ：マーカー
I ：Sf9細胞のライセート
FT ：素通り画分
E ：溶出したEGFP
本製品よりEGFPを発現するSf9（昆虫細胞）のライセートから、EGFPを精製した後、電気泳動を行い、ゲルをCBB染色した。その結果、EGFPを特異的に精製できていることが示されています。
適用
- 免疫沈降（Co-IP）
- クロマチン免疫沈降（ChIP）
- RIPアッセイ（RNA免疫沈降）
- FPLC（GFP-nAb™ Polyacrylamide Resinのみ適用可）
- 定量分析
- 相互作用のあるタンパク質の探索
- CLIP アッセイ（in vivo クロスリンクと免疫沈降）
特異性
本製品は以下の遺伝子改変GFPタンパク質も精製可能です。
| UV Proteins | CyPet | Emerald / mEmerald |
| Sirius | mTurquoise | EGFP / mEmerald |
| Blue Proteins | mTurquoise2 | Clover |
| Azurite | Sapphire-type Proteins | Yellow Proteins |
| EBFP2 | Sapphire | EYFP / mEYFP |
| mKalama1 | T-Sapphire | Topaz / mTopaz |
| Cyan Proteins | mAmetrine | Venus / mVenus |
| ECFP / mECFP | GFPuv | SYFP2 |
| Cerulean / mCerulean | Green Proteins | Citrine / mCitrine |
| SCFP3A | Superfolder GFP | Ypet |
キット内容
ここではGFP-nAb™ Magnetic Kit（20回）を紹介します。キットには試料の調製からタンパク質の精製までに必要な一連の試薬から構成されています。
| キット内容 | 組成 |
| GFP-nAb™ Magnetic beads | － |
| 1x Lysis Buffer | 20mM Tris-HCl pH 7.5, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 0.5% NP-40 |
| 1x Binding Buffer | 10mM Tris-HCl pH 7.5, 150mM NaCl |
| 1x Wash Buffer | 10mM Tris-HCl pH 7.5, 500mM NaCl |
| 1x Elution Buffer | 200mM glycine pH 2.5 |
| 1x Neutralization Buffer | 1M Tris Base |
*磁気スタンドは別途必要となります。
*なお、Agarose Spin Kitは各種緩衝液の他に、スピンカラムも同封されています。
価格表
キット以外にキットの構成品も販売しています。
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | 価格 |
|---|---|---|---|
| GFP-nAb™ Magnetic Kit | ABP-NAB-GFPMK20 | 20 回 | 83,000 |
| GFP-nAb™ Magnetic | ABP-ＮAB-GFPM025 | 250 µl | 39,000 |
| ABP-NAB-GFPM050 | 500 µl | 71,000 | |
| ABP-NAB-GFPM100 | 1 ml | 127,000 | |
| nAb™ Magnetic Control | ABP-nAb-MCNTRL5 | 500 µl | 11,000 |
| GFP-nAb™ Agarose Spin Kit | ABP-NAB-GFPAK20 | 20 回 | 83,000 |
| GFP-nAb™ Agarose | ABP-NAB-GFPA025 | 250 µl | 39,000 |
| ABP-NAB-GFPA050 | 500 µl | 71,000 | |
| ABP-NAB-GFPA100 | 1 ml | 127,000 | |
| nAb™ Agarose Control | ABP-nAb-ACNTRL5 | 500 µl | 11,000 |
| nAb™ Spin Kit Columns and Buffers | ABP-NAB-SPINK20 | 20 回 | 22,000 |
| GFP-nAb™ Polyacrylamide Resin | ABP-NAB-GFPP010 | 1 ml | 199,000 |
| ABP-NAB-GFPP050 | 5 ml | ご照会 | |
| ABP-NAB-GFPP100 | 10 ml | ご照会 | |
| GFP-nAb™ Purified Protein | ABP-NAB-GFPAB | 250 µg | 40,000 |
※記載の内容は、'14年7月現在の情報に基づいております。