CRISPR/Casはゲノム編集の最新技術として注目されています。高い特異性と低い細胞毒性で、特定のゲノムを切断したり、置換することが可能です。
CRISPR/Cas9ゲノム編集システムは、ヒトU6ポリメラーゼIIIプロモーターから発現されるguide RNAとCas9タンパク質の共発現を必要とします。ゲノムDNA上のターゲット配列の3'末端側に存在するPAM配列（NGG）を目印として、Cas9はターゲット配列に相補的なgRNA と複合体を形成してターゲット配列を認識し、PAM配列より上流の二本鎖DNAを切断します。切断されたゲノムDNAが修復・組換えされることを利用して、ノックアウトやノックインを作製することができます。
■ 製品ラインアップ
OriGene社では、guide RNAとCas9タンパク質を共発現するプラスミドベクターを提供しています。gRNAとCas9を共発現する基本的なスタンダードタイプの他、GFPモニタリング用、レンチウイルスベクター作製用、in vitroトランスクリプション用をラインアップしています。
スタンダードタイプ、GFPモニタリング用、レンチウイルスベクター作製用は、クローニング用に突出末端を持つようにあらかじめカットされたプレカットタイプ（線状化）と制限酵素BamH I/BsmB Iサイトを持つ環状プラスミドタイプの2種類から選択いただけます。
| 用途 | 発現 | ベクター |
| スタンダードタイプ | gRNA, Cas9 | pCas-Guide |
| GFPモニタリング | gRNA, Cas9-Myc/DDK, tGFP | pCas-Guide-GFP |
| レンチウイルスベクター作製 | gRNA, Cas9-Myc/DDK | pLenti-Cas-Guide |
| in vitroトランスクリプション |
gRNA |
pT7-Guide pT7-Cas9 |
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メーカー情報
● pCas-Guide
The pCas-Guide vector is designed for cloning a guide RNA insert for genome editing purpose. The vector also has a CMV-driven codon-optimized Cas9. When co-transfected with a proper donor DNA, targeted genome editing can be achieved. The vector retains the ampicillin resistance gene for the selection of E. coli transformants. The vector is supplied as a precut vector, ready for insert ligation. This system has been successfully validated in multiple cases of genome editing.
| pCas-Guide Cloning Kit Cat # GE100001 |
pCas-Guide Cat # GE100002 |
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● pCas-Guide-GFP
The pCas-Guide-GFP vector is designed for cloning a guide RNA insert for genome editing purpose. The vector also expresses a CMV-driven codon-optimized Cas9, C-terminal Myc-DDK tagged. In addition, pCas-Guide-GFP vector also expresses PGK promoter driven GFP to monitor transfected cells. When co-transfected with a proper donor DNA, your desired targeted genome editing can be achieved. The vector retains the ampicillin resistance gene for the selection of E. coli transformants.
| pCas-Guide-GFP Cloning Kit Cat # GE100011 |
pCas-Guide-GFP |
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● pLenti-Cas-Guide
The pLenti-Cas-Guide vector is designed for cloning a guide RNA insert for genome editing purpose. pLenti-Cas-Guide vector is also a 3rd generation lentiviral vector that you can generate lentiviral particles to infect your hard to transfect cells including primary and stem cells. The target sequence can be cloned into the vector via BamH I and BsmB I sites. The vector also expresses a CMV-driven codon-optimized Cas9, C-terminal Myc-DDK tagged. When co-transfected with a proper donor DNA, your desired targeted genome editing can be achieved. The vector retains the chloramphenical resistance gene for the selection of E. coli transformants.
| pLenti-Cas-Guide Cloning Kit Cat # GE100009 |
pLenti-Cas-Guide |
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● in vitro transcription
To make gene knockout out animals, Cas9 mRNA and gRNA are often injected into the embryos; the T7 driven CRISP/Cas system will serve the purpose. pT7-Guide vector can be used to clone the target genomic sequence; the gRNA expression is under T7 promoter. Therefore gRNA can be produced using T7 in vitro transcription system. In pT7-Cas9 vector, Cas9 gene is under T7 promoter; therefore Cas9 mRNA can be produced using T7 in vitro transcription system.
| pT7-Guide Cat # GE100013 |
pT7-Cas9 Cat # GE100014 |
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